4-Нитрофенил бета-D-галактопиранозид CAS:200422-18-0

Үр нөлөө: ONPG нь β-галактозидаза ферментийн илрэл болон идэвхжилийг илрүүлэхэд тусгайлан ашигладаг субстрат юм. β-галактозидаза фермент байгаа бөгөөд идэвхтэй байх үед ONPG-г хоёр бүтээгдэхүүн болгон задалдаг: o-нитрофенол ба галактозын дериватив. O-нитрофенолын ялгаралт нь шар өнгөний өөрчлөлтөд хүргэдэг бөгөөд үүнийг спектрофотометр ашиглан хэмжиж болно.

Хэрэглээ: ONPG нь молекул биологи, биохимийн судалгаанд хэд хэдэн хэрэглээтэй:

β-галактозидазын идэвхжилийг тодорхойлох: ONPG-г β-галактозидазын ферментийн идэвхжилийг хэмжих, тоон үзүүлэлтээр илэрхийлэх зорилгоор түгээмэл хэрэглэдэг. Ферментийн идэвхжилтэй шууд пропорциональ байдаг о-нитрофенол үүсэх хурдыг спектрофотометрийн аргаар хэмжиж болно.

Генийн илэрхийлэл ба зохицуулалт: ONPG-г генийн илэрхийлэл ба зохицуулалтын судалгаатай холбоотой туршилтуудад ихэвчлэн ашигладаг. Үүнийг тодорхой промоторуудын хяналтан дор генийн илэрхийлэлийг судлахын тулд түгээмэл хэрэглэгддэг lacZ нэгтгэх систем гэх мэт нэгдлийн уургийн шинжилгээнд ихэвчлэн ашигладаг. ONPG ашиглан хэмжсэн бета-галактозидазын идэвхжил нь генийн илэрхийлэлийн түвшингийн талаарх ойлголтыг өгдөг.

β-галактозидазын идэвхжилийг шалгах: ONPG-г рекомбинант ДНХ-ийн технологид β-галактозидазыг кодчилдог LacZ генийн байгаа байдал болон үйл ажиллагааг тодорхойлохын тулд колориметрийн шалгах арга болгон ашиглаж болно. Энэхүү шалгах арга нь сонирхсон генийг агуулсан клонуудыг тодорхойлоход тусалдаг.

Ферментийн кинетикийн судалгаа: ONPG нь β-галактозидаза ферментийн кинетикийг судлахад бас хэрэгтэй. Фермент-субстратын урвалын хурдыг субстратын янз бүрийн концентрацид хэмжих замаар Михаэлис-Ментений тогтмол (Km) болон хамгийн их урвалын хурд (Vmax) зэрэг кинетик параметрүүдийг тодорхойлох боломжтой.