Дитиотреитол (DTT) нь шинэ ногоон нэмэлт гэгддэг түгээмэл хэрэглэгддэг бууруулагч бодис юм.Энэ нь хоёр меркаптан бүлэг (-SH) бүхий жижиг молекул органик нэгдэл юм.DTT нь бууруулагч шинж чанар, тогтвортой байдлын улмаас биохими, молекул биологийн туршилтанд өргөн хэрэглэгддэг.
DTT-ийн гол үүрэг нь уураг болон бусад биомолекул дахь дисульфидын холбоог багасгах явдал юм.Дисульфидын холбоо нь уургийн нугалах, тогтвортой байдлын чухал хэсэг боловч бууруулж болох SDS-PAGE шинжилгээ, уургийн рекомбинац, нугалах зэрэг туршилтын тодорхой нөхцөлд дисульфидын холбоог тиолын хоёр бүлэг болгон багасгах шаардлагатай. уураг.DTT нь дисульфидын холбоотой урвалд орж, тэдгээрийг меркаптан бүлэг болгон бууруулж, уургийн орон зайн бүтцийг нээж, дүн шинжилгээ хийх, удирдахад хялбар болгодог.
DTT нь ферментийн үйл ажиллагаа, тогтвортой байдлыг хамгаалахад ашиглаж болно.Зарим ферментийн катализаторын урвалын үед ферментийн идэвхийг исэлдүүлэгчээр бууруулж болно.DTT нь исэлдүүлэгч бодисуудтай урвалд орж, тэдгээрийг хоргүй бодис болгон бууруулж, улмаар ферментийн үйл ажиллагаа, тогтвортой байдлыг хамгаалдаг.
β-меркаптоэтанол (β-ME) зэрэг уламжлалт бууруулагч бодисуудтай харьцуулахад DTT нь илүү аюулгүй бөгөөд тогтвортой бууруулагч бодис гэж тооцогддог.Энэ нь усан уусмалд тогтвортой байхаас гадна өндөр температур, хүчил-суурь нөхцөлд бууруулагч шинж чанараа хадгалдаг.
DTT ашиглах нь харьцангуй энгийн.Ерөнхийдөө DTT-ийг зохих буферт уусгаад туршилтын системд нэмнэ.DTT-ийн оновчтой концентрацийг тусгай туршилтын дагуу тодорхойлох шаардлагатай бөгөөд ерөнхийдөө 0.1-1мМ-ийн хязгаарт ашиглагддаг.Бага концентраци нь эсийн өсөлтөд үзүүлэх сөрөг нөлөөллийг бууруулж, зорилтот уургийн хэт их илэрхийлэлээс болж цитотоксик чанарыг бууруулдаг.Илүү их концентраци нь эсийн бодисын солилцооны хэт ачааллыг үүсгэж, эсийн өсөлт, экспрессийн үр ашигт нөлөөлдөг.
Хамгийн оновчтой концентрацийг тодорхойлох арга нь өөр өөр концентрацид IPTG индукцийн туршилт хийх замаар зорилтот уургийн экспрессийн түвшинг үнэлэх явдал юм.Жижиг хэмжээний өсгөвөрлөх туршилтыг IPTG концентрацийн хүрээг (жишээ нь 0.1 мМ, 0.5 мм, 1 мМ гэх мэт) ашиглан хийж болох ба өөр өөр концентраци дахь экспрессийн нөлөөг зорилтот уургийн (жишээ нь барууны) илэрхийлэх түвшинг илрүүлэх замаар үнэлж болно. толбо эсвэл флюресцент илрүүлэх).Туршилтын үр дүнгээс үзэхэд хамгийн сайн илэрхийлэх нөлөө бүхий концентрацийг оновчтой концентраци болгон сонгосон.
Нэмж дурдахад, та ижил төстэй туршилтын нөхцөлд түгээмэл хэрэглэгддэг IPTG концентрацийн хүрээг ойлгохын тулд холбогдох ном зохиол эсвэл бусад лабораторийн туршлагаас лавлаж, туршилтын хэрэгцээнд нийцүүлэн оновчтой болгож, тохируулж болно.
Хамгийн оновчтой концентраци нь янз бүрийн экспрессийн систем, зорилтот уураг, туршилтын нөхцлөөс хамаарч өөр өөр байж болохыг анхаарах нь чухал тул тохиолдол бүрээр оновчтой болгох нь зүйтэй.
Дүгнэж хэлэхэд, DTT нь уураг болон бусад биомолекул дахь дисульфидын холбоог багасгах, ферментийн үйл ажиллагаа, тогтвортой байдлыг хамгаалахад ашигладаг түгээмэл хэрэглэгддэг бууруулагч бодис юм.Энэ нь биохими, молекул биологийн туршилтуудад өргөн хэрэглэгддэг.
Шуудангийн цаг: 2023 оны 9-р сарын 28