Дитиотреитол (DTT) нь түгээмэл хэрэглэгддэг бууруулагч бодис бөгөөд шинэ ногоон нэмэлт гэгддэг. Энэ нь хоёр меркаптан бүлэг (-SH) бүхий жижиг молекулт органик нэгдэл юм. Бууруулагч шинж чанар болон тогтвортой байдлаасаа шалтгаалан DTT-г биохими болон молекул биологийн туршилтанд өргөн ашигладаг.
DTT-ийн гол үүрэг бол уураг болон бусад биомолекул дахь дисульфидын холбоог багасгах явдал юм. Дисульфидын холбоо нь уургийн нугалалт болон тогтвортой байдлын чухал хэсэг боловч SDS-PAGE шинжилгээ, уургийн рекомбинаци болон нугалалт зэрэг тодорхой туршилтын нөхцөлд уургийн орон зайн бүтцийг задлахын тулд дисульфидын холбоог хоёр тиол бүлэг болгон бууруулах шаардлагатай байдаг. DTT нь дисульфидын холбоотой урвалд орж, тэдгээрийг меркаптан бүлэг болгон бууруулж, улмаар уургийн орон зайн бүтцийг нээж, шинжлэх, удирдахад хялбар болгодог.
ДТТ-г ферментийн идэвхжил болон тогтвортой байдлыг хамгаалахад ашиглаж болно. Зарим ферментийн катализжуулсан урвалд ферментийн идэвхжил исэлдүүлэгч бодисоор буурч болно. ДТТ нь исэлдүүлэгч бодисуудтай урвалд орж, тэдгээрийг хоргүй бодис болгон бууруулж, улмаар ферментийн идэвхжил болон тогтвортой байдлыг хамгаалж чадна.
β-меркаптоэтанол (β-ME) зэрэг уламжлалт бууруулагч бодисуудтай харьцуулахад DTT нь илүү аюулгүй, илүү тогтвортой бууруулагч бодис гэж тооцогддог. Энэ нь зөвхөн усан уусмалд тогтвортой байхаас гадна өндөр температур болон хүчил-суурь нөхцөлд бууруулагч шинж чанараа хадгалдаг.
ДТТ-г ашиглах нь харьцангуй энгийн. Ерөнхийдөө ДТТ-г зохих буферт уусгаад дараа нь туршилтын системд нэмнэ. ДТТ-ийн оновчтой концентрацийг тодорхой туршилтын дагуу тодорхойлох шаардлагатай бөгөөд ерөнхийдөө 0.1-1мМ-ийн хүрээнд ашигладаг. Бага концентраци нь эсийн өсөлтөд үзүүлэх сөрөг нөлөөллийг бууруулж, зорилтот уургийн хэт их илэрхийлэлээс үүдэлтэй цитотоксик чанарыг бууруулж болно. Өндөр концентраци нь эсийн бодисын солилцооны хэт ачааллыг үүсгэж, эсийн өсөлт, илэрхийлэлийн үр ашигт нөлөөлж болзошгүй.
Хамгийн оновчтой концентрацийг тодорхойлох арга бол IPTG индукцийн туршилтыг өөр өөр концентрацид хийх замаар зорилтот уургийн экспрессийн түвшинг үнэлэх явдал юм. Жижиг хэмжээний өсгөврийн туршилтыг IPTG концентрацийн хүрээг (жишээ нь 0.1 мМ, 0.5 мМ, 1 мМ гэх мэт) ашиглан хийж болох бөгөөд өөр өөр концентрацид экспрессийн нөлөөг зорилтот уургийн экспрессийн түвшинг илрүүлэх замаар (жишээ нь Вестерн блот эсвэл флуоресценцийн илрүүлэлт) үнэлж болно. Туршилтын үр дүнгээс харахад хамгийн сайн экспрессийн нөлөөтэй концентрацийг оновчтой концентраци болгон сонгосон.
Үүнээс гадна, та ижил төстэй туршилтын нөхцөлд түгээмэл хэрэглэгддэг IPTG концентрацийн хүрээг ойлгохын тулд холбогдох уран зохиол эсвэл бусад лабораторийн туршлагыг лавлаж, дараа нь туршилтын хэрэгцээнд нийцүүлэн оновчтой болгож, тохируулж болно.
Хамгийн оновчтой концентраци нь өөр өөр илэрхийлэлийн систем, бай уургууд болон туршилтын нөхцлөөс хамааран өөр өөр байж болохыг анхаарах нь чухал тул тохиолдол бүрээр оновчтой болгох нь хамгийн сайн арга юм.
Товчхондоо, ДТТ нь уураг болон бусад биомолекул дахь дисульфидын холбоог багасгах, ферментийн идэвхжил болон тогтвортой байдлыг хамгаалахад ашиглаж болох түгээмэл хэрэглэгддэг бууруулагч бодис юм. Үүнийг биохими болон молекул биологийн туршилтанд өргөн ашиглаж ирсэн.
Нийтэлсэн цаг: 2023 оны 9-р сарын 28