Хамгийн оновчтой концентрацийг хэрхэн тодорхойлох вэ?
Индукторын хувьд IPTG (изопропил-бета-д-тиогалактозид) өндөр концентрацитай байх тусмаа сайн.Хамгийн оновчтой концентраци нь туршилтын тодорхой нөхцөл, хүссэн индукцийн нөлөөллөөс хамаарна.
Ерөнхийдөө IPTG-ийн концентрацийг 0.1-1 мМ-ийн хүрээнд ашигладаг.Бага концентраци нь эсийн өсөлтөд үзүүлэх сөрөг нөлөөллийг бууруулж, зорилтот уургийн хэт их илэрхийлэлээс болж цитотоксик чанарыг бууруулдаг.Илүү их концентраци нь эсийн бодисын солилцооны хэт ачааллыг үүсгэж, эсийн өсөлт, экспрессийн үр ашигт нөлөөлдөг.
Хамгийн оновчтой концентрацийг тодорхойлох арга нь өөр өөр концентрацид IPTG индукцийн туршилт хийх замаар зорилтот уургийн экспрессийн түвшинг үнэлэх явдал юм.Жижиг хэмжээний өсгөвөрлөх туршилтыг IPTG концентрацийн хүрээг (жишээ нь 0.1 мМ, 0.5 мм, 1 мМ гэх мэт) ашиглан хийж болох ба өөр өөр концентраци дахь экспрессийн нөлөөг зорилтот уургийн (жишээ нь барууны) илэрхийлэх түвшинг илрүүлэх замаар үнэлж болно. толбо эсвэл флюресцент илрүүлэх).Туршилтын үр дүнгээс үзэхэд хамгийн сайн илэрхийлэх нөлөө бүхий концентрацийг оновчтой концентраци болгон сонгосон.
Нэмж дурдахад, та ижил төстэй туршилтын нөхцөлд түгээмэл хэрэглэгддэг IPTG концентрацийн хүрээг ойлгохын тулд холбогдох ном зохиол эсвэл бусад лабораторийн туршлагаас лавлаж, туршилтын хэрэгцээнд нийцүүлэн оновчтой болгож, тохируулж болно.
Хамгийн оновчтой концентраци нь янз бүрийн экспрессийн систем, зорилтот уураг, туршилтын нөхцлөөс хамаарч өөр өөр байж болохыг анхаарах нь чухал тул тохиолдол бүрээр оновчтой болгох нь зүйтэй.
Шуудангийн цаг: 2023 оны 9-р сарын 28