Хамгийн оновчтой концентрацийг хэрхэн тодорхойлох вэ?
Индуктор IPTG (изопропил-бета-d-тиогалактозид)-ийн хувьд концентраци өндөр байх тусам сайн. Хамгийн оновчтой концентраци нь туршилтын тодорхой нөхцөл байдал болон хүссэн индукцийн үр нөлөөнөөс хамаарна.
Ерөнхийдөө IPTG-ийн концентрацийг 0.1-1 мМ хооронд ашигладаг. Бага концентраци нь эсийн өсөлтөд үзүүлэх сөрөг нөлөөллийг бууруулж, зорилтот уургийн хэт их экспрессээс үүдэлтэй цитотоксик чанарыг бууруулж болно. Өндөр концентраци нь эсийн бодисын солилцооны хэт их ачааллыг үүсгэж, эсийн өсөлт болон экспрессийн үр ашигт нөлөөлдөг.
Хамгийн оновчтой концентрацийг тодорхойлох арга бол IPTG индукцийн туршилтыг өөр өөр концентрацид хийх замаар зорилтот уургийн илэрхийлэлийн түвшинг үнэлэх явдал юм. Жижиг хэмжээний өсгөврийн туршилтыг IPTG концентрацийн хүрээг (жишээ нь 0.1 мМ, 0.5 мМ, 1 мМ гэх мэт) ашиглан хийж болох бөгөөд өөр өөр концентрацид илэрхийллийн нөлөөг зорилтот уургийн илэрхийллийн түвшинг илрүүлэх замаар (жишээ нь Вестерн блот эсвэл флуоресценцийн илрүүлэлт) үнэлж болно. Туршилтын үр дүнгээс харахад хамгийн сайн илэрхийллийн нөлөөтэй концентрацийг оновчтой концентраци болгон сонгосон.
Үүнээс гадна, та ижил төстэй туршилтын нөхцөлд түгээмэл хэрэглэгддэг IPTG концентрацийн хүрээг ойлгохын тулд холбогдох уран зохиол эсвэл бусад лабораторийн туршлагыг лавлаж, дараа нь туршилтын хэрэгцээнд нийцүүлэн оновчтой болгож, тохируулж болно.
Хамгийн оновчтой концентраци нь өөр өөр илэрхийлэлийн систем, бай уургууд болон туршилтын нөхцлөөс хамааран өөр өөр байж болохыг анхаарах нь чухал тул тохиолдол бүрээр оновчтой болгох нь хамгийн сайн арга юм.
Нийтэлсэн цаг: 2023 оны 9-р сарын 28