Бидний эргэн тойронд энгийн мэт санагддаг ч үнэндээ бидэнд маш их хувь нэмэр оруулдаг олон алдартай баатрууд байдаг. Протеиназа К бол молекулын оношилгооны салбарын "алдарлагдаагүй баатар" боловч салбарын "том бөгөөд хүчирхэг"-тэй харьцуулахад протеиназа К нь маш даруухан тул бид түүний ач холбогдлыг удаан хугацаанд үл тоомсорлож ирсэн. Шинэ титэм цар тахлын дэгдэлттэй холбоотойгоор протеиназа К-ийн эрэлт хэрэгцээ огцом өсч, дотоод болон гадаадад нийлүүлэлт хэрэглээнээс хамаагүй хоцорч, хүн бүр протеиназа К маш чухал гэдгийг гэнэт ойлгосон.
Протеиназа К-ийн хэрэглээ юу вэ?
Протеиназа К нь протеолитик ферментийн идэвхжилтэй серин протеаза бөгөөд олон төрлийн орчинд (рН (4-12.5), давсны өндөр буфер, 70°C өндөр температур гэх мэт) идэвхжилээ хадгалж чаддаг. Үүнээс гадна, протеиназа К-ийн идэвхжил нь SDS, мочевин, EDTA, гуанидин гидрохлорид, гуанидин изотиоцианат гэх мэтээр дарангуйлагддаггүй бөгөөд тодорхой хэмжээний угаалгын нунтаг нь протеиназа К-ийн идэвхжилийг нэмэгдүүлдэг. Эмчилгээ (вирус ба бичил биетний ариутгал), хоол хүнс (мах зөөлрүүлэх), арьс шир (үс зөөлрүүлэх), дарс үйлдвэрлэл (спиртээр тодруулах), амин хүчлийн бэлдмэл (муудсан өд), нуклейн хүчлийн олборлолт, газар дээр нь эрлийзжүүлэх гэх мэт) протеиназа К-ийн хэрэглээ байдаг. Хамгийн түгээмэл хэрэглэгддэг хэрэглээ бол нуклейн хүчлийн олборлолт юм.
Протеиназа К нь дээжинд байгаа бүх төрлийн уургийг, түүний дотор нуклейн хүчилтэй нягт холбогдсон гистонуудыг ферментжүүлж, нуклейн хүчлийг дээжээс ялгаруулж, ханд руу оруулж, дараагийн ялгах, цэвэршүүлэх алхамыг хөнгөвчилдөг. Вирусын нуклейн хүчлийг илрүүлэхэд протеиназа К нь вирусын дээж авах уусмалын чухал бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн нэг юм. Протеиназа К нь вирусын бүрхүүлийн уургийг хагалж, идэвхгүй болгож чаддаг бөгөөд энэ нь тээвэрлэлт болон илрүүлэх үе шатанд илүү аюулгүй байдаг; үүнээс гадна протеиназа К нь РНХ-г задалж, вирусын РНХ-ийн задралаас сэргийлж, нуклейн хүчлийг илрүүлэх ажлыг хөнгөвчилдөг.
Протеиназа К-ийн шөнийн алдар нэр
Шинжлэх ухааны судалгааны салбарт ч бай, IVD-ийн салбарт ч бай, нуклейн хүчлийн олборлолт нь хамгийн энгийн туршилт тул протеиназа К нь үргэлж маш чухал оршин тогтнол байсаар ирсэн. Гэсэн хэдий ч өмнө нь протеиназа К нь түүний үүргээс хамаагүй бага мэдэгддэг байсан. Үүний гол шалтгаан нь протеиназа К-ийн эрэлт ба нийлүүлэлтийн хамаарал маш тогтвортой байсантай холбоотой юм. Протеиназа К-ийн нийлүүлэлт асуудал болно гэж цөөхөн хүн бодох байх.
Шинэ титэм цар тахал дэгдсэнээр нуклейн хүчлийн шинжилгээний эрэлт хэрэгцээ эрс нэмэгдсэн. 2020 оны 6-р сарын сүүлчээр Хятад улс бараг 90 сая шинэ титэм шинжилгээ хийсэн бөгөөд энэ тоо дэлхийн хэмжээнд бүр ч түгшүүртэй байна. Нуклейн хүчлийн олборлолтын туршилтад протеиназа К-ийн ажлын концентраци нь ойролцоогоор 50-200 мкг/мл байдаг. Ерөнхийдөө нуклейн хүчлийн дээжийг гаргаж авахад 100 мкг протеиназа К шаардлагатай байдаг. Бодит хэрэглээнд нуклейн хүчлийн олборлолтын үр ашгийг нэмэгдүүлэхийн тулд протеиназа К-г ихэвчлэн их хэмжээгээр ашигладаг. Шинэ коронавирусын нуклейн хүчлийг илрүүлснээр протеиназа К-ийн эрэлт хэрэгцээ ихэссэн. Протеиназа К-ийн анхны нийлүүлэлт ба эрэлтийн тэнцвэр хурдан эвдэрч, протеиназа К нь нэг шөнийн дотор цар тахлаас урьдчилан сэргийлэх чухал материал болсон.
Протеиназа К үйлдвэрлэхэд тулгардаг бэрхшээлүүд
Хэдийгээр цар тахлын үед хүмүүс протеиназа К-ийн чухал ач холбогдлыг үнэлж байсан ч протеиназа К-ийн хэт даруу байдлаас болж протеиназа К-ийн үйлдвэрлэлд цөөн тооны дотоодын компаниуд оролцож байгаа нь ичмээр юм. Хүмүүс протеиназа К-ийн үйлдвэрлэлийг бий болгохыг хүсэх үед Үйлдвэрлэлийн явцад протеиназа К нь маш онцгой уураг болохыг олж мэдсэн. Протеиназа К-ийн үйлдвэрлэлийн хүчин чадлыг богино хугацаанд өргөжүүлэх нь маш хэцүү байдаг.
Протеиназа К-ийн томоохон хэмжээний үйлдвэрлэл дараах бэрхшээлүүдтэй тулгардаг.
1. Бага илэрхийлэл
Протеиназа К нь ихэнх уургийг өвөрмөц бус байдлаар задалж, экспрессийн эзэн эсэд ноцтой хордлого үүсгэдэг. Тиймээс протеиназа К-ийн экспрессийн түвшин ерөнхийдөө маш бага байдаг. Протеиназа К-г өндөр хэмжээгээр экспресслэдэг экспрессийн систем болон омгийг илрүүлэхэд ерөнхийдөө илүү урт мөчлөг шаардлагатай байдаг.
2. Пигмент ба нуклейн хүчлүүдийн үлдэгдэл
Их хэмжээний исгэх нь их хэмжээний пигмент болон эзэн нуклейн хүчлийн үлдэгдлийг нэвтрүүлдэг. Эдгээр хольцыг энгийн цэвэршүүлэх процессоор зайлуулахад хэцүү бөгөөд нарийн төвөгтэй цэвэршүүлэлт нь зардлыг нэмэгдүүлж, нөхөн сэргээх түвшинг бууруулдаг.
3. Тогтворгүй байдал
Протеиназа К нь хангалттай тогтвортой биш, өөрөө ферментжүүлж чаддаг бөгөөд хамгаалалтын бодисгүйгээр 37°C-д удаан хугацаанд тогтвортой хадгалахад хэцүү байдаг.
4. Хур тунадасжихад хялбар
Хөлдөөж хатаасан протеиназа К нунтаг бэлтгэхдээ хөлдөөж хатаасан нунтаг дахь протеиназа К-ийн хатуу агууламж их байгаа эсэхийг баталгаажуулахын тулд өндөр концентрацитай хөлдөөж хатаасан хамгаалалтын бодис нэмэх шаардлагатай боловч протеиназа К-ийн концентраци 20мг/мл ба түүнээс дээш түвшинд хүрэхэд тунадас үүсэх нь амархан бөгөөд энэ нь хатуу агууламж өндөртэй протеиназа К-ийг хөлдөөж хатаахад ихээхэн бэрхшээл учруулдаг.
5. Их хэмжээний хөрөнгө оруулалт
Протеиназа К нь хүчтэй протеазын идэвхжилтэй бөгөөд лабораторид бусад протеазуудыг гидролизжүүлж чаддаг. Тиймээс протеиназа К нь судалгаа, хөгжүүлэлт, үйлдвэрлэлд мэргэшсэн үйлдвэрлэлийн талбай, тоног төхөөрөмж, боловсон хүчин шаарддаг.
XD BIOCHEM-ийн протеиназа К уусмал
XD BIOCHEM нь боловсорсон уургийн экспресс болон цэвэршүүлэх платформтой бөгөөд рекомбинант уургийг экспресс болон цэвэршүүлэх, үйлдвэрлэлийн процессыг оновчтой болгох чиглэлээр баялаг туршлагатай. Судалгаа, хөгжүүлэлтийн багийг хурдан бүрдүүлснээр протеиназа К-ийн томоохон хэмжээний үйлдвэрлэлийн процессыг даван туулсан. Хөлдөөж хатаасан нунтагны сарын гарц нь 30 кг-аас дээш байдаг. Бүтээгдэхүүн нь тогтвортой гүйцэтгэлтэй, ферментийн өндөр өвөрмөц идэвхжилтэй, эзэн цитохром болон нуклейн хүчлийн үлдэгдэлгүй. XD BIOCHEM-тэй холбоо барихад тавтай морилно уу. Туршилтын багц авах (И-мэйл:sales@xdbiochem.comУтас: +86 513 81163739).
XD BIOCHEM-ийн техникийн шийдлүүд нь дараахь зүйлийг агуулдаг.
Олон хуулбартай плазмидын интеграцийг ашиглан 8г/л экспрессийн түвшинтэй өндөр экспрессийн омгуудыг сонгосон бөгөөд энэ нь протеиназа К-ийн экспрессийн түвшин бага байх асуудлыг даван туулдаг.
Олон үе шаттай цэвэршүүлэх процессыг бий болгосноор протеиназа К-ийн эзэн цитохром болон нуклейн хүчлийн үлдэгдлийг стандарт утгаас доогуур амжилттай арилгасан.
Хамгаалалтын буфер найрлагыг өндөр хүчин чадлаар скрининг хийх замаар протеиназа К-г 37°C-д тогтвортой хадгалах боломжтой буферийг сонгосон.
Скрининг буфер нь протеиназа К нь өндөр концентрацид амархан нэгтгэгдэж, тунадасжих асуудлыг даван туулж, протеиназа К-ийн өндөр хатуу агууламжтай хөлдөөж хатаах үндэс суурийг тавьдаг.
XD BIOCHEM протеиназа К дээж
XD BIOCHEM протеиназа К тогтвортой байдлын тест: өрөөний температурт 80 хоногийн дараа идэвхжилд мэдэгдэхүйц өөрчлөлт гарахгүй
XD BIOCHEM протеиназа К-ийн тогтвортой байдлын тест: өрөөний температурт 80 хоногийн дараа идэвхжилд мэдэгдэхүйц өөрчлөлт гарахгүй.
XD BIOCHEM протеиназа К болон өрсөлдөгч бүтээгдэхүүний нуклейн хүчлийн ялгах нөлөөг харьцуулсан байдал. Нуклейн хүчлийн ялгах процесст XD BIOCHEM болон өрсөлдөгч протеиназа К-г тус тус ашигладаг. XD BIOCHEM протеиназа К-ийн ялгах үр ашиг өндөр бөгөөд зорилтот генийн Ct утга бага байдаг.
Нийтэлсэн цаг: 2021 оны 12-р сарын 31